TRIzol
新型总RNA抽提试剂
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历史版本
TRIzol试剂是一种含有异硫氰酸胍和酚的单相液，能迅破碎细胞并制细胞释放出的核酸酶。可从多种生物样品中分离高质量总RNA或同时分离RNA、DNA和蛋白。解耦联剂异硫酸胍是一类强力的蛋白质变性剂，可溶解蛋白质，并使蛋白质二级结构消失，细胞结构降解，核蛋白解离。酚裂解细胞，使细胞中的蛋白质和核酸解聚。酚还变性蛋白质，部分抑制RNA酶活性。[3][1]
组成与工作原理
Trizol试剂是一种含有水饱和酚，8-羟基喹啉、异硫氰酸胍，β-巯基乙醇等成分的混合物。其工作原理是首先通过苯酚、异硫氰酸胍裂解细胞，异硫氰酸胍它既可破坏细胞结构使核酸从核蛋白中解离出来,又对RNA酶有强烈的变性作用，使细胞中的RNA释放[4];8-羟基啉、异硫氰酸胍、β-基乙醇等可以抑制RNA酶活性，保护RNA完整性。随后加入的氯仿则促使细胞裂解液分层,DNA、蛋白质与苯酚结合后存在于下层的氯仿有机相，而RNA存在与上层的水相，从而实现RNA的分离与提取。上层水相中的RNA，经过异丙醇与乙醇的多步沉淀与洗涤,去除盐杂质以及多余的水,得到纯化的RNA分子,最后使用琼脂糖凝胶电泳检测所提纯的总RNA浓度以及完整性用核酸测定仪进行精确定量。[2]